一例由PCV2感染引起母猪产木乃伊胎的诊断报告

    2016-03-15 11:13  来源:猪业科学  查看:

      导语:猪圆环病毒病感染是指由猪圆环病毒(PCV)引起的猪的一种传染病,其主要临床特征为母猪繁殖障碍、体质下降、消瘦、呼吸困难、贫血、黄疸、生长发育不良、腹泻、内脏器官及皮肤的广泛病理变化,特别是肾、脾脏及全身淋巴结的高度肿大、出血和坏死。PCV分为PCV1和PCV2两个血清型,PCV2危害极大。猪圆环病毒自2000年由郎洪武等在国内首次报道以来,全国各省(市)先后有PCV2 感染病例报道 。猪圆环病毒病在世界范围内广泛流行,给养猪业带来巨大危害,由PCV2引起的母猪流产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍疾病更应引起重视。

      2015年11月贵州省贵阳市某种猪场发生一起母猪繁殖障碍,送检的同窝胎儿既有木乃伊胎,也有死胎。据送检猪场描述的临床特征,初步判断与病毒感染有关。为筛查具体病原,实验室对送检木乃伊及死胎的组织混合样品分别对猪JEV(日本乙型脑炎病毒)、PPV (猪细小病毒)、CSFV(猪瘟病毒)、PRRSV (猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒)、PRV (猪伪狂犬病毒)和 PCV2(猪圆环病毒2型)6种常见病毒进行了病原核酸检测,现将相关检测及结果报道如下。

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      1.1 病料

      分别采自送检同窝木乃伊胎、死胎的组织混合病料(心、肝、脾、肺、肾、淋巴结等脏器和脑组织),见图1。

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      1.2 主要试剂

      TakaRa Mini BEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 4.0、Prime Script One Step RT-PCR Kit Ver.2.0、DL2000;其他试剂均为国产分析纯。

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      2.1  病料的处理及核酸的提取

      采集送检胎儿组织混合样品,碾磨匀浆,反复冻融3次之后,12 000r/min离心10 min,取上清,用TakaRa Mini BEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 4.0试剂盒提取核酸。

      2.2  引物合成

      相关引物为由本实验室所保存的参考据GenBank中关于PCV2、CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV序列设计并合成的特异性引物。

      2.3  病原核酸检测

      参照一步法RT-PCR试剂盒说明书,对PCV2、CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV进行检测。反应总体系为50 μL :2×1 Step Buffer 25 μL,模板7.0 μL,上下游引物各1.0 μL,Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 μL,Release Free H2O 14 μL;反应条件均为:95 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s,57 ℃ 30 s,72  ℃ 30 s,35个循环;72 ℃ 10 min。扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测。

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      通过对送检样品进行病原核酸检测,结果见图2。电泳结果显示CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV的检测结果均为阴性;对PCV2检测结果为阳性,扩增条带与预期的353bp扩增片段相符,表明送检死胎可能存在PCV2感染。

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